簡要描述：SCALEVIEW系列是用于ScaleS法的試劑。ScaleS法是一項由國立研究開發法人理化學研究所的宮脇敦史老師等人開發的，使用以尿素為主要成分的試劑溶液的透明化技術。SCALEVIEW不僅可以透明化含熒光蛋白的活體樣品，還可以有效地利用抗體或熒光染料標記厚標本，作為腦組織、球體和類器官的分析工具備受期待。
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革新腦科學研究的光學方法
SCALEVIEW系列
SCALEVIEW系列是用于ScaleS法的試劑。ScaleS法是一項由國立研究開發法人理化學研究所的宮脇敦史老師等人開發的，使用以尿素為主要成分的試劑溶液的透明化技術。SCALEVIEW不僅可以透明化含熒光蛋白的活體樣品，還可以有效地利用抗體或熒光染料標記厚標本，作為腦組織、球體和類器官的分析工具備受期待。
◆Scale法是什么？
傳統透明化技術中常使用有機溶劑，但在發光過程中，需要水分子的熒光蛋白在此條件下會明顯褪色。
針對該問題，研究人員開發了使用水溶液的透明化技術——Scale法（ScaleA2法和ScaleS法的總稱）1-2）。
Scale法使用尿素、表面活性劑、甘油（ScaleA2法）或shan梨醇（ScaleS法）的混合溶液來抑制光散射，從而實現組織透明化的同時熒光蛋白不褪色。此外，脫脂所需的表面活性劑含量少，透明化后也可保持良好的超微結構。
初次嘗試組織透明化的用戶，推薦使用這種能較好平衡透明度和結構保持的Scale法。
圖1. PI染色的YER-H line小鼠大腦半球切片
數據提供：日本國立研究開發法人理化學研究所 腦神經科學研究中心細胞機能探索技術研究小組/光量子工學研究中心生命光學技術研究小組 濱裕老師、星田哲志老師、宮脇敦史老師（贊助：奧林巴斯株式會社）
特點
● 操作簡便（僅需將組織依次浸入溶液）
● 約1日即可完成2 mm腦組織塊的透明化
● 透明化后可用于熒光染料染色（ChemScale）和免疫組織染色（AbScale或AbScale-G）
適用樣品
小鼠腦、人死后腦、骨骼（需脫鈣處理）、類器官/球體等
◆選擇指南
應用 | 熒光蛋白 | 熒光染料 | 標記抗體（免疫染色） | ||
方法 | ScaleS | ChemScale | AbScale | AbScale-G | |
所需試劑 | SCALEVIEW-S Trial Kit | ? | |||
SCALEVIEW-A2 | ? | ? | ? | ||
SCALEVIEW-S0 | ? | ? | ? | ||
SCALEVIEW-S4 | ? | ? | ? | ||
deScale solution | ? | ? | ? | ? | |
AbScale-G Solution Kit | ? | ||||
所需時間 | 約1天 | 約4~7天 | 約4~7天 | 約4~7天 | |
備注 | • 可與熒光蛋白共染色 | • 可與熒光蛋白共染色 | • 可與熒光蛋白共染色 | ||
各試劑的說明
▼ SCALEVIEW-S Trial Kit
本試劑盒包含6種類型的溶液：SCALEVIEW-S0、SCALEVIEW-S1、SCALEVIEW-S2、SCALEVIEW-S3、SCALEVIEW-S4、SCALEVIEW-SMt。通過將組織浸入各溶液中，即可快速簡便地實現透明化，并對折射率進行調整。
▼ SCALEVIEW-A2
基于2011年報告的透明化方法Scale的透明化溶液。折射率（20℃）較低，設定為RI = 1.377-1.381，無需高昂的顯微鏡設備也可輕松匹配折射率，推薦初次嘗試透明化的用戶使用。
▼ deScale solution
ScaleS法的清洗步驟中使用的試劑。
簡單透明化球體
僅使用SCALEVIEW-S4透明化球體的protocol3）和實驗數據可參考SCALEVIEW-S4的產品頁面。
其他所需的儀器、器材和試劑
▼儀器、器材
● 熒光顯微鏡
● ※ 請根據折射率（SCALEVIEW-A2: RI=1.38, SCALEVIEW-S4: RI=1.47, SCALEVIEW-SMt: RI=1.49）選擇合適的物鏡。
● 建議在獲取數據之前與您使用的顯微鏡廠家進行聯系。
● 錐形管（請根據樣品，選擇5 mL/15 mL/30 mL/50 mL）
● 塑料培養皿（請根據樣品，選擇直徑35 mm、直徑60 mm或直徑100 mm）
● 搖床
▼試劑
● 多聚甲醛（產品編號：160-16061）
● 1 × PBS (產品編號：164-25511)
● 瓊脂糖
◆數據
腦組織
ScaleS：小鼠腦切片及腦半球的透明化
▼Protocol
灌注固定+后固定 | 透明化 | 清洗 | 透明化 | 觀察 | |||||
4%PFA/PBS(-) | PBS(-) | SCALEVIEW-S0 | SCALEVIEW-S1 | SCALEVIEW-S2 | SCALEVIEW-S3 | deScale Solution | SCALEVIEW-S4 | SCALEVIEW-SMt | SCALEVIEW-SMt |
4°C | RT | 37°C | 37°C | 37°C | 37°C | 4°C | 37°C | 37°C | RT |
各溶液的使用量（以小鼠腦半球1~2 mm的厚切片為例*）
【透明化】SCALEVIEW-S0/S1/S2/S3：各5 mL / deScale Solution 5 mL
【觀 察】SCALEVIEW-SMt：5 mL
*試劑的使用量和處理時間因樣品尺寸而異。
ScaleS：YFP-H系統小鼠全腦透明化
| 物種：小鼠 (Thy1-YFP-H line, 20W, ♂) 組織：全腦 顯微鏡：多光子激光掃描顯微鏡 (Evident，FVMPE-RS) 物鏡：XLPLN10XSVMP (NA 0.6) 激光：960 nm （YFP） 圖像尺寸：512 x 512, 170 tiles, Z=8,000 μm, Z Step 16 μm |
ScaleS：透明化小鼠腦切片并使用熒光標記的凝集素觀察血管
| 物種：小鼠（C57BL6/J、10.5日齡) 組織：大腦冠狀切面 (1.2 mm厚) 顯微鏡：共聚焦激光掃描顯微鏡（正置式） 凝集素：Texas Red標記 番茄凝集素 |
ScaleA2：YFP-H系統小鼠全腦透明化
物種：小鼠 組織：全腦 物鏡：XLSLPLN25XSVMP (NA 0.90, WD 8 mm) |
ScaleA2：YFP-H系統小鼠海馬透明化
物種：小鼠 組織：海馬體 物鏡：XLPLN25XSVMP (NA1.0, WD 4 mm) |
ChemScale：YFP-H系統小鼠腦半球切片的Propidium iodide (PI) 染色和透明化
| 物種：小鼠（Thy1-YFP-H line, 42W, ♂) 組織：大腦（冠狀面切片, 2 mm厚） 顯微鏡：共聚焦激光掃描顯微鏡（Evident，FV3000，倒置式） 物鏡：UPLSAPO10x2 (NA 0.40) 激光：488 nm (YFP) / 561 nm (PI) |
▼Protocol（詳細protocol）
灌注固定+后固定 | 前處理 | 熒光染料染色 | 透明化 | 觀察 | |||||||
4% PFA/PBS(-) | PBS(-) | SCALEVIEW-S0 | SCALEVIEW-A2 | 8M 尿素 | SCALEVIEW-A2 | deScale Solution | 蛍光染料* | SCALEVIEW-A2 | deScale Solution | SCALEVIEW-S4 | SCALEVIEW-S4 |
4°C | RT | 37°C | 37°C | 37°C | 37°C | 4°C | RT | RT | 4°C | 37°C | RT |
*熒光染料例：125 nM SYTO™61 (Thermo Fisher Scientific), 500 nM DAPI, 1 μM PI
各溶液的使用量（以小鼠腦半球1~2 mm的厚切片為例）
【前處理】SCALEVIEW-S0：10 ｍL / SCALEVIEW-A2：10 mLx2 / deScale Solution10 mL
【染 色】染色溶液：8 mL /deScale Solution：10 mL
【透明化】SCALEVIEW-S4：10 mL
【觀 察】SCALEVIEW-S4：10 mL
AbScale：阿爾茨海默病模型小鼠腦切片的免疫組織化學染色和透明化
| 物種：小鼠（阿爾茨海默病模型，17月齡) 組織：大腦切片（2 mm厚） 顯微鏡：共聚焦激光掃描顯微鏡（Evident，FV1200，倒置式） 物鏡：XLPLN10XSVMP (NA 0.60) |
▼Protocol
灌注固定+后固定 | 前處理 | 免疫染色 | 透明化 | 觀察 | |||||||||
4% PFA/PBS(-) | PBS(-) | SCALEVIEW-S0 | SCALEVIEW-A2 | 8M尿素 | SCALEVIEW-A2 | deScale Solution | 1% 封閉劑*/PBS(-) | 抗體/AbScale Solution** | AbScale Solution** | 4% PFA/PBS(-) | deScale Solution | SCALEVIEW-S4 | SCALEVIEW-S4 |
4°C | RT | 37°C | 37°C | 37°C | 37°C | 4°C | RT | 37°C | RT | 4°C | 4°C | 37°C | RT |
* 推薦試劑：Roche公司 產品編號：11096176001
** AbScale溶液：含0.33 M尿素和0.1％（wt/vol）Triton X-100的PBS(-)溶液（自行配制）
各溶液的使用量（以小鼠腦半球1~2 mm的厚切片為例）
【前處理】SCALEVIEW-S0：10 ｍL / SCALEVIEW-A2：10 mL×2 / deScale Solution：10 mL
【染 色】AbScale Solution：1.5 mL /deScale Solution：10 mL
【透明化】SCALEVIEW-S4：10 mL
【觀 察】SCALEVIEW-S4：10 mL
AbScale-G：阿爾茨海默病模型小鼠腦切片的免疫組織化學染色和透明化
| 物種：小鼠（阿爾茨海默病模型，60周齡) 組織：大腦切片（1 mm厚） 顯微鏡：共聚焦激光掃描顯微鏡（Evident，FV1200，倒置式） 物鏡：XLPLN10XSVMP (NA 0.60)
<數據提供>日本國立理化學研究所腦科學中心 細胞功能發現技術研究團隊 濱老師 |
AbScale-G改善了傳統方法中難以染色的Cy3等熒光染料的滲透性，可以與多種熒光染料和抗體一起使用。
▼Protocol
灌注固定+后固定 | 前處理 | 免疫染色 | 透明化 | 觀察 | |||||||
4% PFA/PBS(-) | PBS(-) | SCALEVIEW-S0 | SCALEVIEW-A2 | 8M尿素 | SCALEVIEW-A2 | deScale Solution | 抗體 /AbScale-G Solution | AbScale-O Solution* | 4% PFA /PBS(-) | SCALEVIEW-S4 | SCALEVIEW-S4 |
4°C | RT | 37°C | 37°C | 37°C | 37°C | RT | 37°C | RT | RT | 37°C | RT |
* AbScale-O 溶液：含0.33 M尿素和0.1% (wt/vol) Triton X-100的PBS(-)溶液（自行配制）
各溶液的使用量（以小鼠腦半球1 mm的厚切片為例）
【 前 處 理】SCALEVIEW-S0: 6 ｍL / SCALEVIEW-A2: 6 mLx2 / deScale Solution: 10 mL
【免疫染色】AbScale-G Solution: 1.5 mL /deScale Solution: 10 mL
【透 明 化 】SCALEVIEW-S4：8 mL
【觀 察】SCALEVIEW-S4：8 mL
球體和類器官
AbScale：大鼠海馬神經干細胞來源神經球的免疫染色和透明化
| 物種：成年大鼠海馬神經干細胞來源神經球 顯微鏡：共聚焦激光掃描顯微鏡（Evident，FV1000） 物鏡：UMPLFLN10XW (NA 0.3) |
▼Protocol
灌注固定+后固定 | 前處理 | 免疫染色 | 透明化 | 觀察 | |||||||||
4% PFA | PBS(-) | SCALEVIEW-S0 | SCALEVIEW-A2 | 8M 尿素 | SCALEVIEW-A2 | deScale Solution | 1% 封閉劑* /PBS(-) | 抗體 /AbScale Solution** | AbScale Solution** | 4% PFA /PBS(-) | deScale Solution | SCALEVIEW-S4 | SCALEVIEW-S4 |
4°C | RT | 37°C | 37°C | 37°C | 37°C | 4°C | RT | 37°C | RT | 4°C | 4°C | 37°C | RT |
* 推薦試劑：Roche公司 產品編號：11096176001
** AbScale溶液：含0.33 M尿素和0.1％（wt/vol）Triton X-100的PBS(-)溶液（自行配制）
各溶液的使用量
【 前 處 理】SCALEVIEW-S0：1.2 ｍL / SCALEVIEW-A2：1.2 mL / deScale Solution：1.2 mL
【免疫染色】以AbScale的Protocol為準
【 透 明 化】SCALEVIEW-S4：1.2 mL
【觀 察】SCALEVIEW-S4：1.2 mL
AbScale：人iPS細胞來源肝細胞（iCell® Hepatocytes2.0）的免疫染色和透明化
明亮視野 |
FITC |
明亮視野+ FITC | 樣品：iCell® Hepatocytes2.0 球體形成板：Prime Surface® 96孔板 一抗：抗ABCB11抗體 二抗：抗兔IgG(H+L)，山羊，FITC標記 |
▼Protocol
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| iCell® Hepatocytes2.0在平板培養中成熟化 | 使用球體形成板制備球體 | 使用SCALEVIEW透明化 |
點擊此處查看相關產品宣傳冊：組織透明化試劑（第3版）
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 299-79901 | SCALEVIEW-S Trial Kit SCALEVIEW-S試劑盒小包裝 | 1 Kit | 組織透明化用 | |
| 193-18455 | SCALEVIEW-A2 SCALEVIEW® 組織透明化試劑A2 | 500 mL | 組織透明化用 | |
| 196-18521 | SCALEVIEW-S0 SCALEVIEW® 組織透明化試劑S0 | 250 mL | 組織透明化用 | |
| 194-18561 | SCALEVIEW-S4 SCALEVIEW-S4組織透明化試劑 | 250 mL | 組織透明化試劑 | |
| 041-34425 | deScale Solution 透明化洗滌溶液 | 500 mL | 組織透明化試劑 | |
| 293-97001 | AbScale-G Solution Kit | 1 Kit | 組織透明化試劑 |
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