高通量細(xì)胞外囊泡/外泌體分離純化試劑盒

外泌體等細(xì)胞外囊泡（EV: Extracellular Vesicle）不僅參與排放生物體內(nèi)的廢棄物，同時(shí)也是細(xì)胞間的通信媒介。根據(jù)分泌的細(xì)胞不同，EV的特性及其內(nèi)含物（核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等）也有所差異，目前正在嘗試將參與疾病的細(xì)胞來(lái)源EV及其內(nèi)含物作為生物標(biāo)記應(yīng)用于“液體活檢"，即通過(guò)體液樣品診斷疾病。

為實(shí)現(xiàn)液體活檢的開發(fā)和應(yīng)用，需要從大量的樣品中高效地分離和純化EV。但超速離心法等傳統(tǒng)方法單次可處理的樣品數(shù)有限，從多個(gè)樣品中分離和純化EV需要花費(fèi)龐大的人力和物力。

因此，F(xiàn)UJIFILM Wako開發(fā)了EV分離純化用試劑盒MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS，適用于提取核酸和蛋白質(zhì)的自動(dòng)提取設(shè)備（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。本試劑盒采用與金澤大學(xué)的華山教授共同開發(fā)的EV分離純化技術(shù)“PS親和法"^1），配合自動(dòng)提取設(shè)備，可同時(shí)分離和純化高純度且低損傷EV的樣品上限為96份。

◆產(chǎn)品概要

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS是使用PS親和法分離和純化細(xì)胞外囊泡（EV）的試劑盒，適用于自動(dòng)提取設(shè)備（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。由于可從多達(dá)96份樣品中分離和純化EV，因此也適用于利用EV進(jìn)行生物標(biāo)記的探索和高通量篩選 (High-throughput screening，HTS) 。

適用自動(dòng)提取設(shè)備（分離成果經(jīng)FUJIFILM Wako驗(yàn)證的設(shè)備）

● KingFisher™ Flex（Thermo Fisher Scientific等）

與手動(dòng)款試劑盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）的區(qū)別

比較本試劑盒與手動(dòng)分離純化試劑盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2, 產(chǎn)品編號(hào)：290-84103），兩者的區(qū)別如下表所示。另，EV的回收效率基本持平。（參考“性能數(shù)據(jù)"）

◆原理

PS親和法是FUJIFILM Wako研發(fā)的EV分離方法，使用了與存在于EV表面的磷脂酰si氨酸（PS）特異性結(jié)合的Tim4。

通過(guò)PS-Tim4結(jié)合的高特異性和螯合劑，可在完整狀態(tài)下溫和地洗脫高純度EV。

◆實(shí)驗(yàn)方案

使用KingFisher™ Flex分離純化EV（進(jìn)行從親和反應(yīng)到洗脫一系列過(guò)程時(shí)）

※將親和反應(yīng)和洗脫步驟作為單獨(dú)的程序分別進(jìn)行，并使用新的tip comb進(jìn)行洗脫，可能可以減少樣品中的雜質(zhì)。更多信息請(qǐng)參閱使用說(shuō)明書。

實(shí)驗(yàn)方案的詳細(xì)內(nèi)容和設(shè)置示例請(qǐng)查閱使用說(shuō)明書。

◆數(shù)據(jù)

與手動(dòng)試劑盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）比較的性能數(shù)據(jù)

通過(guò)NTA，比較分離的粒子數(shù)

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto，自動(dòng)提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual，手動(dòng)提取)，從血清、肝素血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清（COLO201）中分離和純化EV。通過(guò)Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)確認(rèn)EV的粒子數(shù)

【結(jié)果】

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手動(dòng)試劑盒獲得了相同程度的粒子數(shù)。

通過(guò)ELISA，比較分離的粒子數(shù)

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自動(dòng)提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手動(dòng)提取)，從血清、肝素血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清（COLO201）中分離和純化EV。然后使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) （產(chǎn)品編號(hào)：298-80601）確認(rèn)EV的回收率。

【結(jié)果】

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手動(dòng)試劑盒獲得了相同程度的回收率。

通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)分析，比較分離的蛋白質(zhì)種類、蛋白量

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自動(dòng)提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手動(dòng)提取)方法對(duì)200 μL人血清分離和純化EV。蛋白質(zhì)組學(xué)分析回收的EV溶液。

（1）鑒定的蛋白質(zhì)種類

【結(jié)果】

在4次實(shí)驗(yàn)中，MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS與手動(dòng)試劑盒相比，鑒定的蛋白質(zhì)數(shù)量始終更多、再現(xiàn)性更高。

（2）EV標(biāo)記蛋白質(zhì)的量

【結(jié)果】

分別使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手動(dòng)試劑盒進(jìn)行分離的EV中所含的EV標(biāo)記蛋白質(zhì)之間并無(wú)顯著差異，自動(dòng)化對(duì)EV的回收率沒有影響。

（3）非EV標(biāo)記的量（以白蛋白為例）

【結(jié)果】

與手動(dòng)試劑盒相比，使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS純化分離的非EV標(biāo)記物白蛋白量更少，表明可回收雜質(zhì)更少的EV。

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